ハイスループット組織グラインダー購入ガイド

核酸抽出またはタンパク質分析のために数百の組織サンプルを準備したことのある人なら誰でも、どこでスケジュールが中断されるか知っています。抽出化学物質、プレートリーダー、およびサーマルサイクラーはすべて予測可能な速度で動作しますが、均質化は組織の種類、サンプルの質量、および 1 つの機器が一度に処理できるチューブの数によって大きく変動します。サンプルを一度に 1 つのチューブずつ破砕すると、プレート全体に 1 日の作業時間がかかる可能性があり、最初のチューブと最後のチューブの間の変動は誰も計画していなかった変数になります。

ハイスループットの組織グラインダーは、単一チューブ形式から並列の密閉形式に破壊を移動します。密封されたジャー内で複数のサンプルが同時に処理されるため、スループットはオペレーターの手ではなく、機器上の位置の数によって決まります。機械的エネルギーがどのように生成されるのか、それを制限するものは何か、特定のサンプル混合物に適合する機械をどのように指定するかなど、工学的な疑問は単純明快です。

検出ではなく破壊がサンプル前処理のペースを決める理由

均質化は、ほとんどの分子ワークフローにおいて最も標準化されていないステップですが、それには十分な理由があります。繊維質の維管束を含む葉の組織、脂質含有量の高い肝臓、密な結合組織を含む筋肉、および硬いミネラル相を含む種子はすべて、同じ機械的入力に対してそれぞれ異なる反応を示します。柔らかい肝臓からきれいなライセートを生成する設定では、葉の中肋が無傷のまま残される可能性があり、種子を破壊するのに十分な強力な設定では、脳組織の DNA が切断される可能性があります。

2 つの障害モードが支配的ですが、どちらも通常はバッチが終了した後にのみ発見されます。 1つ目は不完全な破壊です。無傷のフラグメントには、ライセートに決して入らない核酸とタンパク質が保持されるため、収量が低下し、定量の信頼性が低くなります。 2つ目は過剰な破壊です。過剰なエネルギー、不必要に長いサイクル、または温かいジャーは、アッセイで測定するように設計された分子を正確に分解し、長い DNA を下流のライブラリー調製を複雑にするサイズに断片化する可能性があります。

これらの失敗によるコストはサンプル自体に限定されません。バッチを繰り返す必要があると、試薬、装置時間、オペレーターの注意力が消費され、臨床試験や農業試験では、遅延により結果が報告期間を超えてしまう可能性があります。失敗はチューブ レベルではなくバッチ レベルで発生するため、追跡も困難です。オペレーターは数日後に収量が低いかシーケンス結果が劣悪であることに気づきますが、原因となるチューブが 1 つも明らかではありません。したがって、中断ステップを標準化することは、時間を節約するだけでなく、リスク管理の決定でもあります。

機器を選択する前に、ワークフロー自体に関する 4 つの質問に答えることが役立ちます:

• 1 回の作業セッションで処理するサンプルの数と頻度はどれくらいですか?
• 繊維組織、脂肪組織、石化組織、または凍結組織の中で最も硬い組織は何ですか?
• RNA、無傷のタンパク質、酵素、または長いゲノム DNA のうち、熱に最も敏感な分析物はどれですか?
• 微量金属またはポリマーの汚染は下流のアッセイにとって懸念事項ですか?

これら 4 つの答えは、必要な機械的エネルギーと、機器が遵守しなければならない温度および汚染の制限の両方を定義するため、単一の仕様数値よりも早く分野を絞り込みます。

ハイスループット組織グラインダーの仕組み

ハイスループット組織グラインダーは、生体サンプルに適合したボールミル スタイルの機器です。各サンプルは、1 つまたは複数の粉砕ボールとともに、それぞれの密封された瓶またはチューブに入れられます。ホルダーは一度に複数のジャーを運び、機械はデザインに応じて垂直方向の振動、水平方向の振動、または惑星状のパターンなど、急速な反復運動によってジャーを駆動します。破壊は、回転ブレードが組織を切り裂くことによるのではなく、メディアが組織に繰り返し衝突して転がるときの衝撃、せん断、摩擦によって発生します。

この取り決めから 3 つの実際的な結果が得られます。サンプルは処理中密閉されたままとなるため、エアロゾルの形成が制限され、物質が位置間で移動する可能性が減ります。組織を破壊する同じ動作によってホモジネートの混合も維持されるため、分析用に採取されたサブサンプルが全体を表す可能性が高くなります。また、エネルギーはプローブではなく媒体を介して供給されるため、ジャーは使い捨て、オートクレーブ可能、またはサンプルに合わせて選択された材料で作成できます。これは、微量分析で金属接触を排除する場合に大きな利点となります。

ハイスループットの組織グラインダーは、一度に 1 つのチューブではなく、複数の密封されたサンプルを並行して破砕します。

動作タイプは研削動作と摩耗パターンの両方を形成するため、モデルを比較する前に理解しておく価値があります。垂直振動により強い衝撃成分が発生し、脆性凍結材料に効果を発揮します。水平方向の振動は、ジャーの壁全体の摩擦とせん断を強調し、より柔らかい水和組織に適しています。遊星運動は自転と公転を組み合わせているため、媒体はより長い経路を移動し、サンプルはジャー内で継続的に再分配されます。これらはどれも普遍的に優れているわけではありません。正しい選択は、日常的な混合物が硬い繊維質サンプルによって占められているか、それとも繊細なサンプルによって占められているかによって決まります。

密封された瓶内での衝撃、せん断、摩擦

衝撃は、脆弱な、凍結した、または石化した組織の主要なメカニズムです。高密度のボールが高速で移動すると、接触点でエネルギーが伝達され、組織は最も弱い面に沿って破壊されます。せん断力は、柔らかく水和したサンプルでは重要になります。組織は破損する前に変形し、ボール表面とサンプルの間の界面で有益な仕事が起こります。摩擦はジャーの壁に沿っておよび粒子間に継続的に作用し、実行中に生成される熱のほとんどは摩擦によって発生します。

これら 3 つのメカニズムは交換可能ではなく追加的なものであるため、1 つの動作パラメーターを変更しても、結果に予測可能な線形の変化が生じることはほとんどありません。周波数が増加すると、衝撃エネルギーが増加しますが、摩擦項も増加するため、熱に敏感なサンプルは、より多くのエネルギーが適用された場合でも、最終的に劣化が悪化する可能性があります。このため、新しい組織のプロトコルは通常、保守的な設定から開始して、分析物が無傷のままで破壊が完了するまで段階的に作業を進めながら経験的に構築されます。

実際のベンチ用語での「高スループット」の意味

メーカーはスループットを実行ごとのサンプル数として見積もっていますが、スケジュールに影響を与える数値は、ロード、冷却、洗浄、品質チェックを含む作業時間あたりのサンプル数です。多くのポジションを備えているが、低速で厄介なローディングルーチンを実行する機器は、実際には、事前に充填されたチューブを受け入れてすぐに開始する小型のマシンよりも遅くなる可能性があります。

したがって、実際に稼働しているラボでのスループットは、複数の要因によって同時に左右されます。:

• ホルダー内で利用できる独立したジャーまたはチューブの位置の数。
• 平均的なものではなく、ルーチン混合における最も硬い組織のサイクル時間。
• 別のバッチの実行中に jar をロードおよびアンロードできるかどうか。
• バッチ間の洗浄時間、特に RNA または病原性物質を扱う場合。
• プロトコルにアクティブな冷却が必要か、それとも総実行時間を延長する断続的なサイクルが必要か。

の ハイスループット組織グラインダー から TENCAN は、この並行処理原理に基づいて構築されており、サンプル量と検体の感度に適合できるジャー形式とホルダー配置が備えられています。関連する選択の問題は、理論上に存在する位置の数ではなく、検査室が実際に受け取るサンプルで日常的に使用できる位置の数です。

粉砕メディアとジャーの材質をサンプルの種類に合わせる

メディアと瓶の材料は、プロトコルが成功するかどうかを最もよく決定する 2 つの選択肢ですが、これらは後付けとして扱われることがよくあります。材料は、密度、硬度、摩耗挙動、およびサンプルに付着する可能性のある汚染の種類を決定します。ステンレス鋼、ジルコニア、メノウ、炭化タングステン、PTFE などのポリマーはすべて実験室の研削に使用されており、破壊力と清浄度のトレードオフにおいてそれぞれ異なる位置を占めています。

機械的破壊も他の溶解方法と同様の手法です。化学的および酵素的溶解はより穏やかでハードウェアを必要としませんが、試薬によりサンプルあたりのコストが増加し、酵素による消化にはインキュベーションステップが必要であり、どちらの方法も硬い繊維状または石灰化した組織にはうまく対応できません。機械的研削は、熱伝達、メディアの磨耗、クリーニングの管理を犠牲にして、より高速でより汎用的です。多くの研究室では、短い機械的ステップを使用して構造を破壊し、その後界面活性剤または酵素化学に依存して溶解を完了します。これにより、機械的サイクルが短く保たれ、熱への曝露が制限されます。

媒体の密度、サイズ、サンプルの硬度

密度の高い媒体は、各衝突により多くの運動エネルギーを運びます。そのため、硬いサンプルや繊維状のサンプル、および凍結した材料に好まれます。ペナルティは 2 つあります。エネルギーが増えると熱も増加し、媒体が硬いほど硬いサンプルに対して摩耗が早くなり、微量物質がホモジネート中に放出されます。ジルコニアは密度が高く化学的に安定しているため、多くの生物学的用途に有用な中間点を提供しますが、分析方法が金属イオンに対して異常に敏感な場合には、メノウやポリマー媒体が選択されます。

ボールのサイズは密度とは逆の方向に働きます。多くの小さなボールはより多くの接触点を形成し、特定のエネルギーレベルでより細かく均一なホモジネートを生成する傾向があり、小さなサンプル塊や繊細な組織に適しています。ボールの数が少なく、ボールが大きいほど、個々の衝撃がより強くなり、種子、骨、軟骨、または昆虫のクチクラに対してより効果的になります。サンプル質量に対する培地の質量の比は、破砕が完了するまでの速度を最も直接的に制御する変数であり、目に見える無傷の組織でサイクルが終了するときに最初に調整することになります。

汚染制御とポジション間のクロストーク

汚染は 2 つの方法でサンプル前処理ワークフローに入ります。ジャーおよび培地から放出された物質と、前のサンプルから持ち越された物質です。一つ目は資料に関する質問です。スチール製メディアは酸性緩衝液と接触すると鉄とクロムを放出する可能性があり、セラミック製メディアは少量の独自の成分を放出する可能性があります。微量元素分析の場合、ポリマージャーまたは酸洗浄されたセラミックジャーはバックグラウンドを低減しますが、通常の DNA およびタンパク質のワークフローは通常、関係するレベルでのメディアの磨耗の影響を受けません。

2つ目は取り扱いに関する質問です。位置間のクロストークは、主にジャーの密閉、サンプルのロード方法、およびバッチ間の洗浄プロトコルに依存します。密封されたジャーと使い捨てチューブ形式により、エアロゾルと液体のキャリーオーバーの両方が制限され、書面による洗浄順序 (すすぎ、洗剤、すすぎ、適切な除染液、乾燥) は、単一のハードウェアよりも再現性を高めます。強力なアルカリ溶液や一部の有機溶剤は特定のポリマーやコーティングを攻撃するため、どのジャー素材がオートクレーブ滅菌できるか、またどの洗浄剤が互換性があるかをサプライヤーに確認してください。

温度制御と極低温粉砕

ティッシュグラインダーに関する苦情のほとんどは熱に遡ります。組織を破壊するために必要な機械的エネルギーは、組織が破壊されても消えません。その一部は接触点で熱に変換され、各サンプルは熱容量が限られた小さな密閉容積で処理されるため、ジャー内の温度は直感が示唆するよりも早く上昇する可能性があります。 RNA、無傷のタンパク質、酵素の場合、その上昇が、きれいな調製物と分解された調製物の違いとなります。

通常、3 つのアプローチが組み合わされます。 1 つ目は事前凍結です。サンプルは急速冷凍され、冷たいうちに処理されます。これにより、脆弱な組織がより容易に破壊され、発生する熱の一部が相殺されます。液体窒素とドライアイスの両方が使用されますが、どちらも適切な個人用保護具と換気が必要です。 2 つ目は、断続的な操作 (冷却休止によって区切られた短い粉砕間隔) です。これは、多くの場合、周波数を下げて 1 回連続して実行するよりも、熱に弱いサンプルの場合により効果的です。 3 つ目は、器具とジャーの材質がジャー ホルダーをサポートするジャー ホルダー自体の能動的な冷却です。

凍結により、温度だけでなく粉砕の仕組みも変化します。完全に凍結したサンプルは脆い固体のように振る舞い、きれいに割れます。部分的に解凍されたサンプルは柔らかい固体のように動作し、代わりに変形することでエネルギーを吸収します。サンプルを鉱物の硬さまで過度に凍結すると、ジャーや培地の磨耗が早まる可能性があるため、できる限り冷たい状態ではなく、一貫した凍結状態を保つことが目標となります。ジャーの材質は低温での挙動が異なるため、一部のポリマーは脆くなるため、液体窒素に関するルーチンを構築する前にサプライヤーに極低温適合性を確認してください。

熱が蓄積する場所を考えることも役立ちます。ジャーの完全なホルダーは、部分的に装填されたジャーよりも多くの熱を発生し、高密度組織のバッチは同数以上の柔らかいサンプルを生成するため、半分装填された機器で検証されたプロトコルは、最大容量では異なる動作をする可能性があります。実験室が機器の位置限界近くでの運転を計画している場合、温度挙動は小さなテスト バッチから推測するのではなく、現実的な負荷の下で検証する必要があります。

均質化の品質を決定する操作パラメータ

ハードウェアが修正されると、結果は少数の変数セットによって決まります。これらは相互作用するため、実際的なアプローチは、一度に 1 つずつ変更して、何が起こったかを記録することです。

1. ジャーあたりのサンプル質量。 過負荷は、培地がサンプル中を自由に移動できないため、不完全な破壊を引き起こす最も一般的な単一の原因です。
2. メディア対サンプルの比率。 メディアの質量が増えると混乱が加速しますが、発熱と摩耗が増加します。
3. ボールの数と直径。 エネルギーが小さな接触の数だけ到達するか、強い衝撃の数が少ないほど到達するかを決定します。
4. 発振周波数と振幅。 サイクルごとに利用可能な運動エネルギーと熱が蓄積する速度を設定します。
5. サイクルタイムとサイクル数。 混乱が完了すると、Longer は支援を停止します。
6. 冷却間隔。 機械的作業全体を減らすことなく、熱に弱い分析物を保護します。
7. バッファーの量と組成。 熱容量、泡立ち、ホモジネートの回収のしやすさに影響します。
8. 前処理。 組織を小片に切断し、硬い結合構造を除去し、一貫して凍結することにより、実行ごとの変動が減少します。

周波数と時間はオペレーターが最初に調整する 2 つの設定であり、設定が高すぎる可能性が最も高い 2 つでもあります。有用なルールは、現実的な負荷の下でバッチ内の最も硬いサンプルを完全に破壊する最短のサイクルを見つけ、そのバッチ内で最も感度の高い分析物が生き残ることを確認することです。これら 2 つの要件が矛盾する場合、通常は時間通りに差異を分割するのではなく、媒体、サンプル質量、または冷却を変更することによって矛盾を解決する必要があります。

バッファーの選択には、通常よりも注意を払う必要があります。ジャー内の液体は熱質量を増加させるため、温度上昇が遅くなりますが、液体が多すぎると媒体の衝撃が緩和され、有効な衝突エネルギーが減少します。激しい運動下で発泡する溶解バッファーもサンプルをジャーのシールに押し込み、サンプルが乾燥して次のバッチを汚染する可能性があります。液体の量を控えめかつ一定に保ち、発泡しにくい緩衝剤の化学薬品を選択すると、機器の設定を変更することなく、機械的ステップがより予測可能になります。

再現可能なプロトコルの構築

再現性は、機器を単独で制御することではなく、入力を制御することによってもたらされます。サンプル質量は秤量するか、少なくとも一貫して推定する必要があり、組織は同様のサイズに切断する必要があり、処理前の凍結時間は標準化する必要があり、同じ種類の組織には同じジャーと培地セットを使用する必要があります。目に見える無傷の材料を含め、結果と一緒に設定を記録することで内部参照が構築され、新しい種類の組織が現れた場合のトラブルシューティングが大幅に迅速化されます。

外観よりも検証が重要です。均一に見えるホモジネートには無傷の細胞が含まれている可能性があり、完全に破壊されたサンプルでも RNA が失われている可能性があります。染色されたアリコートの顕微鏡検査、収量の簡単な比較、またはサンプルのサブセットの断片サイズのチェックは、ジャーの目視検査よりも多くのことを知ることができます。どの方法が利用可能であっても、それを新しいプロトコルの 10 番目のバッチではなく、最初のバッチに適用してください。

ハイスループット組織グラインダーの選択基準

仕様書では、印刷が容易で比較が難しい数値が強調される傾向があります。以下の基準は通常、機器が研究室に適合するかどうかを判断する基準であり、それぞれの基準はカタログから推測するのではなく、サプライヤーに直接確認する価値があります。

何を評価するのか	なぜそれが重要なのか	確認すべきこと
加工箇所数	実行ごとのサンプルとバッチの重複の上限を設定します	使用する予定の jar 形式で使用可能な位置
ジャーおよびチューブの形式	サンプル量の範囲と消耗品のコストを決定します	利用可能な材質、シール方法、およびオートクレーブの限界
モーションの種類とプログラマビリティ	周波数、時間、サイクルを組織ごとに調整できるかどうかを制御します	保存プログラム数とパラメータ範囲
熱管理	RNA、タンパク質、酵素の完全性に影響を与える	冷却アクセサリまたは極低温動作がサポートされているかどうか
汚染プロファイル	ジャーやメディアから放出される物質は微量分析を妨げる可能性があります	アッセイに推奨されるジャーと培地材料
積み込みと掃除のルーチン	多くの場合、スループットと再現性の実際の限界	完全なバッチをロードし、バッチ間でクリーンアップする時間
設置面積、ノイズ、電力	作業中のラボ内のどこに機器を設置できるかを決定します	施設の動作環境要件

これらの基準のうち 2 つは、通常よりも重視されるべきです。 1 つ目はジャー形式です。これにより、サンプル量、密閉動作、洗浄方法、および機器の寿命にわたる消耗品コストが決まります。 2つ目は熱管理です。スループットの目標は達成しているが、熱に弱いサンプルを冷たく保つことができない機械は、単純に問題をオペレーターに転嫁し、オペレーターは冷却休止時間を長くしてより小さなバッチを実行することになり、スループットの利点は消えてしまいます。

研究室がすでに使用しているプレートまたはチューブの形式に機器を適合させることも重要です。既存の抽出プレートまたはチューブラックと位置が一致する機械では、バッチごとに手動での移送ステップが回避されますが、異なるフォーマットに基づいて設計された機械では、処理時間が増加し、その結果、平行性が部分的に打ち消されます。植物科学や土壌研究に拡張する研究室では、サンプルがより硬く、摩耗性が高いため、同じ準備ロジックが適用されますが、より重い粉砕装置がより適切な選択になります。

最後に、この機器が現在ではなく 2 年後にどのように使用されるかを考えてみましょう。 1 つの組織タイプから開始した研究室がそこにとどまることはほとんどありません。 TENCAN ハイスループット組織グラインダー 複数の jar 材料をサポートし、プログラム可能なパラメータ範囲を備えたものは、単一のアプリケーションに合わせて調整したものよりも適応しやすいです。 Changsha Tianchuang Powder Technology Co., Ltd は、これらのユニットを以下に基づいて供給しています。 TENCAN ブランド、およびジャーの材質、ホルダーの形式、冷却設備などの構成の詳細は、購入前に特定のティッシュのリストと照らし合わせて確認するのが最善です。

洗浄、メンテナンス、長期再現性

機械の磨耗は徐々に進行し、結果への影響はわずかです。時間の経過とともにメディアの質量が減少し、ジャーの表面に微小な亀裂が入り、ホルダーが緩み、高周波動作中にジャーを固定し続けるクランプの一定の圧力が失われます。これらの変更はいずれも明らかな失敗を引き起こしません。その代わり、以前は十分だったサイクル時間が限界となり、結果は試薬のせいになりやすい方向に変動します。

簡単なメンテナンス手順でほとんどのことがカバーされます。各バッチの後に、瓶と培地に亀裂、欠け、変色がないか検査してください。一度に 1 球ずつではなく、メディア セットをまとめてリタイアします。ホルダーとクランプがジャーをまっすぐに固定していることを確認します。また、残留物が漏れやキャリーオーバーの一般的な原因となるため、瓶のネジ山やシール面を注意深く掃除してください。プロトコルが RNA ベースの場合、RNA 作業用に個別のジャーセットまたは少なくとも個別の洗浄シーケンスを指定し、ジャーの材質と適合する除染ソリューションを使用します。

消耗品の計画もメンテナンスの一部です。メディアとジャーは消耗品であり、毎日バッチを実行している研究室では、予測可能な速度でそれらを消費します。予備のメディア セットと予備のジャーを 1 ～ 2 個棚に置いておくと、1 つのジャーにひびが入ったためにプレート全体が遅れるという状況を回避できます。また、各セットの使用期間を追跡することで、結果が変動し始める前に簡単に交換できるようになります。

ドキュメンテーションもメンテナンスの一部です。培地ロット、ジャーセット、サイクル設定、および各組織タイプの観察結果を記録することにより、作業プロトコルが施設の知識に変わり、スタッフが交代する研究室では重要になります。記録されたプロトコルから開始できる新しいオペレーターは、最初の 1 週間を設定を再検出するのではなく、使用可能なデータを作成することに費やします。

ハイスループット組織粉砕に関するよくある質問

1 つの器具で軟組織と繊維組織の両方を処理できますか?

通常はそうですが、条件が 1 つだけあるとそうではありません。肝臓や脳などの軟組織は、通常、より小さな媒体を使用したより短く穏やかなサイクルを必要としますが、線維性または木質化した組織は、より高密度またはより大きな媒体を介して伝達できるより多くの衝撃エネルギーを必要とします。プログラム可能な機器を使用すると、これが実用的になります。できないことは、同じサイクルが両方にとって最適であることを保証することであり、その違いを事前に受け入れることで、大量のサンプルの無駄を防ぐことができます。

ビーズミルスタイルのグラインダーはローターホモジナイザーよりも優れていますか?

二人は異なる問題を解決します。ローターホモジナイザーは単一の大きなサンプルに適しており、オペレーターがプローブを直接制御できますが、一度に 1 つのサンプルを処理するため、キャリーオーバーを避けるためにサンプル間で徹底的な洗浄が必要です。ハイスループットの組織グラインダーは、平行度と密閉処理を直接制御するため、相互汚染が懸念されるプレートスケールのワークフローやサンプルセットに適しています。多くの研究室では両方を保管し、必要に応じてそれぞれを使用します。

1 瓶あたりどれくらいのサンプルが必要ですか?

代表的であるのに十分であり、メディアが自由に移動できるほど十分に小さく、サンプル間で一貫性があります。正確な範囲はジャーの体積、培地サイズ、組織密度に依存するため、一般的な数値から推測するのではなく、特定のジャーの形式に対して確認し、問題の組織でのテスト実行によって正当化するのが最善です。

一部のサンプルでは、​​完全なサイクル後も無傷の断片が表示されるのはなぜですか?

ほとんどの場合、原因は過負荷、メディアの質量が不十分、またはメディアが組織の強度に対して小さすぎることです。場合によっては、バッチの開始時に一部のサンプルがまだ柔らかかった場合、凍結前に一貫性がなくなることがあります。サイクルタイムの増加は、有用な機械的仕事を追加せずに熱を追加するため、荷重の問題に対する最も効率の悪い解決法です。

プロトコルはどのくらいの頻度で再検証する必要がありますか?

合理的な実践は、組織ソース、ジャーまたは培地材料、または抽出化学物質が変化するたびに、また長期にわたる日常的なキャンペーン中に定期的にメソッドを再チェックすることです。摩耗や消耗品の変動はゆっくりと変化するため、通常は、確立された設定が引き続き期待どおりに機能することを確認するには、少数の代表的なサンプルで短い検証を実行するだけで十分です。

組織破壊ワークフローのセットアップは、最終的には、機械的エネルギーをサンプルと検体に同時に適合させ、最後のバッチではなく最初のバッチのデータで両方を検証することです。グラインダーを分析機器として扱う研究室では、記録された設定、定義された媒体、定期的なチェックが行われ、繰り返しの作業に費やす時間が大幅に短縮されます。新しい準備ラインを計画している人は、利用可能な製品を確認できます。 高スループット組織グラインダー構成 オプションを選択し、ルーチンを開始する前に、ジャーの材質、冷却規定、パラメータ範囲を独自の組織リストと照合して確認します。